CN (enamina) Fascia Raman elasticizzata simmetrica vicino a 1595 cm (-1)
Strutture cristalline ad alta risoluzione degli intermedi trans-enammina formati da Sulbactam e acido clavulanico e E166A SHV-1 beta-lattamasi.
(2005) J Biol Chem 280: 34900-34907
PubMed: 16055923 Cerca su PubMed
DOI: 10.1074 / jbc.M505333200
– Citazione primaria di strutture correlate: 2A49, 2A3U
Estratto di PubMed:
La resistenza agli antibiotici mediata da beta-lattamasi in continua evoluzione è una seria minaccia per la salute umana. Il meccanismo di inibizione di questi enzimi da parte degli inibitori terapeutici della beta-lattamasi viene sondato utilizzando un nuovo approccio che coinvolge Raman microsco…
La resistenza agli antibiotici mediata da beta-lattamasi in continua evoluzione è una seria minaccia per la salute umana. Il meccanismo di inibizione di questi enzimi da parte degli inibitori terapeutici della beta-lattamasi viene valutato utilizzando un nuovo approccio che coinvolge la microscopia Raman e la cristallografia a raggi X. Abbiamo presentato qui le strutture cristalline ad alta risoluzione degli inibitori della beta-lattamasi sulbactam e acido clavulanico legati alla variante E166A carente di deacilazione della beta-lattamasi SHV-1. Le nostre precedenti misurazioni Raman hanno identificato le specie trans-enamina per entrambi gli inibitori e sono state utilizzate per guidare il tempo di ammollo e la concentrazione per raggiungere la piena occupazione dei siti attivi. Le due strutture radiografiche legate all'inibitore hanno rivelato un intermedio trans-enamina lineare attaccato in modo covalente al residuo Ser-70 del sito attivo. Si pensava che questo intermedio giocasse un ruolo chiave nell'inibizione transitoria delle beta-lattamasi di classe A. Sia i dati Raman che i raggi X indicavano che l'acido clavulanicol'intermedio è decarbossilato. Quando confrontate con la nostra struttura inibitrice legata al tazobactam precedentemente determinata, le nostre nuove strutture legate all'inibitore hanno rivelato un aumento del disturbo nella regione della coda degli inibitori e nello scheletro dell'enamina. Le osservazioni cristallografiche a raggi X erano correlate con l'allargamento della banda Raman ad allungamento simmetrico OC = CN (enamina) vicino a 1595 cm (-1). L'allargamento della banda negli intermedi sulbactam e acido clavulanico riflette una popolazione conformazionale eterogenea che risulta dalle variazioni degli angoli di torsione nello scheletro O- (C = O) -C = C = NH-C. Queste osservazioni ci hanno portato a concludere che la stabilità conformazionale della forma trans-enamina è fondamentale per la loro efficacia inibitoria transitoria.
